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Institut de pharmacologie moléculaire et cellulaire (Sophia Antipolis, Alpes-Maritimes)

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Most widely held works by Alpes-Maritimes) Institut de pharmacologie moléculaire et cellulaire (Sophia Antipolis
Ischémie médullaire en chirurgie aortique : mécanismes physiopathologiques et prévention pharmacologique by Loïc Lang-Lazdunski( )

2 editions published in 2000 in French and held by 4 WorldCat member libraries worldwide

Les paraplégies dues à une ischémie médullaire sont une complication relativement fréquente de la chirurgie intéressant l'aorte thoracique descendante et thoraco-abdominale. De nombreuses techniques ont été développées afin de maintenir un flux médullaire correct durant le clampage aortique, de manière à augmenter la tolérance médullaire à l'ischémie, ou encore de manière à diminuer les lésions de reperfusion. Aucune technique n'a permis de faire disparaître les paraplégies ischémiques. Nos objectifs étaient de : 1) développer des modèles expérimentaux permettant d'élucider les mécanismes physiopathologiques de l'ischémielreperfusion médullaire, 2) tester de nouvelles drogues neuroprotectrices susceptibles de protéger la moelle épinière durant toute la durée du clampage aortique et de la reperfusion. Nous avons développé un modèle d'ischémie médullaire chez la souris, qui nous a permis d'appréhender les phénomènes de mort cellulaire programmée due aux caspases (apoptose), et qui permet l'étude d'animaux transgéniques, ouvrant ainsi de nouvelles perspectives de recherche. Dans un modèle d'ischémie médullaire chez le lapin, nous avons montré que le riluzole et le sulfate de magnésium, deux drogues anti-excitotoxiques, permettaient de prévenir, ou au moins d'atténuer, les lésions médullaires dues à un clampage prolongé de l'aorte. Le riluzole, déjà utilisé chez l'homme dans le traitement de la sclérose latérale amyotrophique et de la maladie de Huntington, s'avérait particulièrement efficace. Nous avons confirmé l'effet spectaculaire de cette drogue dans un autre modèle d'ischémie médullaire chez le rat. Nous estimons que les phénomènes d'ischémielreperfusion médullaire peuvent être parfaitement étudiés chez les petits rongeurs tels que rat ou souris, qui possèdent une vascularisation médullaire semblable à celle de l'homme. La prévention pharmacologique de l'ischémie médullaire est une approche simple, efficace, ne dépendant pas de l'anatomie du patient ou du type et de l'étendu des lésions aortiques, et pouvant être combinée avec d'autres techniques de protection médullaire. Le riluzole nous semble être, à l'heure actuelle, la drogue la plus efficace pour protéger la moelle épinière lors de chirurgie de l'aorte thoracique ou thoraco-abdominale à haut risque neurologique
Etude pharmacologique et fonctionnelle des antagonistes des récepteurs endothélines : mise en évidence d'inhibiteurs allostériques by Virginie Blandin-Morisot( )

in French and held by 3 WorldCat member libraries worldwide

The discovery of endothelins, potent vasoconstrictor peptides and nitric oxide at the end of the eighties point out a new role of the vascular endothelium. Endothelin-1 (ET-1) is mainly secreted by endothelial cells and acts via two G protein-coupled receptors, ET-A and ET-B. ET-1 is supposed to play an important role in several cardiovascular diseases and cancer. Consequently, pharmaceutical companies are interested in developping receptor antagonists but their action remains unclear in most cases. Actions of ET receptor antagonists have often be described as atypical, in the sense they cannot be interpreted using classical pharmacological reasonning. They have suggested existence of novel forms of receptors or of various forms of cross-talk mechanisms. The first part of this work was to demonstrate that atypical actions of receptor antagonists arise whenever second order binding conditions prevail. In instance BQ-123 insensitive actions of ET-1 can be documented in cells that express functional ET-A and ET-B receptors. One of the main properties of endothelin is its almost irreversible binding to its receptors. This simple fact limits the action of antagonists. The second part of this work was to show that it is possible to overcome the irreversibility of ET-1 binding by using allosteric inhibitors. Aspirin and salicylic acid are such inhibitors. A detailed structure activity relationship study led to identification of 3,5 dibromosalicylic acid as a potent allosteric inhibitor for ET-A receptors. It inhibits ET-1 binding in an apparently competitive manner and potentiates actions of true competitive receptor antagonists
Étude fonctionnelle des souris dont les gènes KCNE1 et TWIK1 ont été invalidés by Isabelle Arrighi( Book )

2 editions published in 2000 in French and held by 2 WorldCat member libraries worldwide

De tous les canaux ioniques, les canaux K+ forment une classe où la diversité structurale et fonctionnelle est certainement la plus importante. Ils interviennent dans un nombre considérable de processus physiologiques. Les canaux K+ sont répartis en trois familles selon leurs propriétés structurales et fonctionnelles, et 67 gènes sont connus à ce jour. Les caractéristiques de la plupart de ces canaux sont bien établies in vitro, mais leur rôle physiologique n'est pas toujours connu. L'invalidation de gènes chez la souris est un outil qui peut permettre de déterminer le rôle d'un gène donné in vitro. Nous avons utlisé cette technique pour étudier la fonction des sous-unités KCNE1 et TWIK1. Les souris kcne1 -/- ont dèjà permis de comprendre la fonction des courants Iks dans l'oreille interne. Ces souris présentent en effet une surdité identique à celle des patients atteints du syndrome de Jervell et Lange-Nielsen. Des mutations de gènes humains kcne1 et kcnq1 ont été associées à ce syndrome cardio-auditif. L'étude de la fonction cardiaque des souris kcne1 -/- a révélé que l'intervalle QT de l'électrocardiogramme n'est pas très différent de celui des souris sauvages. Par contre, la sous-unité KCNE1 permet l'adaptation de l'intervalle QT en fonction des battements du coeur. D'autre part, les souris kcne1 -/- présentent une légère hypokaliémie associée à un hyperaldostéronisme (...). La seconde partie de ce travail concerne l'étude de la sous-unité TWIK1. Ce canal est fortement exprimé dans le système nerveux central et dans de nombreux tissus épithéliaux. (...) L'analyse des électrorétinogrammes montre que les propriétés fonctionnelles de la rétine sont atténuées chez les souris kcne1 -/-
Étude des mécanismes d'adressage dans la voie de sécrétion régulée du précurseur de la neurotensine by Sylvain Feliciangeli( Book )

2 editions published in 2001 in French and held by 2 WorldCat member libraries worldwide

L'adressage des précurseurs hormonaux vers la voie de sécrétion régulée des cellules neuroendocrines est un mécanisme mal connu et très controversé. Les travaux réalisés au cours de cette thèse ont eu pour objectif de caractériser dans la pro-neurotensine/neuromedine N, un précurseur de neuropeptides, les motifs nécessaires à la sécrétion régulée des produits de maturation. Par mutagenèse dirigée et transfection dans des cellules pourvues de la voie de sécrétion régulée, nous avons caractérisé une répétition de motifs discrets indispensable à l'adressage régulé. Cette séquence est capable d'entraîner la sécrétion régulée d'une protéine constitutive. La présence de ce motif ne modifie pas les propriétés d'agrégation in vitro. Le signal caractérisé est impliqué dans l'adressage et la maturation du précurseur. Les résultats de stimulation obtenus dans des cellules incapables de le maturer révèlent une sécrétion régulée même sans clivage. Des larges formes incomplètement maturées issues du précurseur peuvent donc être sécrétées. Ces produits existent dans des situations physiologiques et pathologiques. L'analyse de leurs propriétés biologiques révèlent qu'elles sont capables de se lier au récepteur des peptides et d'induire un signal intracellulaire. Elles représentent donc des ligands potentiels avec des propriétés spécifiques, dont une résistance accrue à la dégradation
Narcose à l'azote : modulation de la neurotransmission striatale chez le rat et implication des canaux potassiques TREK-1 chez la souris by Nicolas Vallee( Book )

2 editions published in 2008 in French and held by 2 WorldCat member libraries worldwide

Chez l'homme, l'augmentation de pression partielle d'azote dans l'organisme induit un syndrome neurologique nommé "narcose à l'azote". Les troubles narcotiques induits par les gaz inertes sous pression affectent, entre autres, le raisonnement, la mémoire et la vigilance. Chez l'animal de laboratoire, les études précédentes ont mis en évidence une altération des voies dopaminergiques nigrostriées, en relation avec la perturbation de la neurotransmission GABAergique. Par analogie avec les mécanismes anesthésiques, il a été suggéré qu'une baisse des taux de glutamate striatal, modulé par la production de monoxyde d'azote, pourrait intervenir dans l'occurrence des troubles narcotiques. Dès lors, nous pouvons formuler l'hypothèse que l'apparition des troubles nerveux serait consécutive à la saturation de l'organisme en gaz inertes, lesquels, soit se fixeraient de manière allostérique sur des récepteurs membranaires spécifiques, soit perturberaient l'organisation de la bicouche lipidique, en fonction de leur coefficient de liposolubilité, soit réorganiseraient les molécules d'eau, au contact des phospholipides et modifieraient de surcroît l'hydratation protéique. La récente mise au point de souris transgéniques dépourvues de canaux transmembranaires mécanosensibles, régulant l'excitabilité membranaire, offre un outil de choix pour l'appréhension de l'influence des gaz inertes sur l'état de fluidité membranaire. Les gaz inertes sous pression sont susceptibles d'étirer la membrane, et de diminuer ainsi l'excitabilité cellulaire en ouvrant les canaux potassiques TREK-1. Les résultats obtenus montrent que les souris TREK-1-/-, par rapport aux souris sauvages TREK-1+/+, présentent un seuil de résistance accru face au pouvoir incapacitant des gaz inertes sous pression. L'ouverture des canaux potassiques TREK-1 serait une cause possible de la diminution des taux striataux de glutamate, des métabolites du monoxyde d'azote et de dopamine, mesurés par HPLC sur les microdialysats cérébraux de rats, exposés à un mélange respiratoire azote-oxygène à 30 atm. Les stimulations proximales (au NMDA) ou distales (au Saclofen et KCl) du striatum n'ont pas permis de rétablir les taux de référence du glutamate extracellulaire. En revanche, ces expériences ont permis d'écarter le rôle précurseur que pourrait avoir la dopamine dans l'occurrence des symptômes narcotiques. La modification des taux extracellulaires de la glutamine, de l'asparagine, et des métabolites de la dopamine, nous renseigne sur l'état de perturbation des mécanismes intracellulaires, probablement en relation avec la baisse de l'excitabilité cellulaire. La théorie d'action diffuse des gaz inertes, de Meyer-Overton et Miller, expliquerait, pour partie, le rôle primordial que joue le canal TREK-1, retranscrivant les altérations membranaires, dans l'apparition des perturbations neurochimiques striatales constatées sous narcose aux gaz inertes
Découverte du gène AROM, "Antisense RNA Overlapping MCH gene" : caractérisation d'une nouvelle famille de protéines liant les acides nucléiques by Laetitia Borsu( Book )

2 editions published in 2000 in French and held by 2 WorldCat member libraries worldwide

Chez les mammifères, le gène de la MCH pour " melanin concentrating hormone", code pour deux peptides le NEI et la MCH. Ce gène est impliqué dans de nombreuses fonctions comme la réponse au stress et le contrôle de la prise alimentaire. Nous avons mis en évidence dans des cellules PC12 non stimulées l'expression d'ARN de hauts poids moléculaires contenant les séquences du gène MCH. En combinant les techniques de Northern blot, RACE PCR et RT-PCR, nous avons établi que ces ARN sont transcrits à partir des séquences du brin d'ADN complémentaire au gène de la MCH. Ce gène appelé AROM pour " antisense RNA overlapping MCH gene " est conservé chez le rat, la souris et l'homme. Dans les cellules PC12 traitées au lithium et au NGF, l'expression du gène MCH est régulée par des mécanismes post-transcriptionnels. Les ARN antisens AROM pourraient interagir avec les ARNm MCH, les hybrides ainsi formés modifieraient leur maturation ou leur dégradation. En effet, de nombreux exemples d'ARN antisens sont décrits comme régulateurs de l'expression de gènes "sens". Plusieurs phases ouvertes de lecture ont été identifiées à partir des ARNm AROM. Elles sont la conséquence d'épissages alternatifs et du choix de sites d'initiation de transcription. La protéine la plus longue a été appelée AROM-p64. Les séquences des phases ouvertes de lecture AROM présentent des homologies avec les motifs RRM/leucine-zipper et un domaine d'une hélicase de procaryotes. Grâce à des anticorps dirigés contre les extrémités de la protéine p64, nous avons identifié ces protéines AROM dans les cellules PC12 et les testicules de rat. (...)
Diversité structurale des phospholipases A2 sécrétées : clonage et étude fonctionnelle de nouvelles enzymes by Emmanuel Valentin( Book )

2 editions published in 2000 in French and held by 2 WorldCat member libraries worldwide

Les phospholipases A2 hydrolysent la liaison ester en position 2 des phospholipides, libérant un acide gras et un lysophospholipide. Ces enzymes jouent un rôle dans la libération d'acide arachidonique et de ses métabolites. Elles interviennent dans des fonctions telles que la digestion, l'inflammation, la défense antibactérienne, le cancer ou l'athérosclérose. Au moins quinze gènes de phospholipases A2 intracellulaires et sécrétées (sPLA2) sont connus. Trois nouvelles sPLA2 de groupe II ont été clonées au cours de cette thèse. Une sPLA2 humaine de groupe III a aussi été clonée. Une sPLA2 de groupe I et cinq sPLA2 de groupe III homologues à la sPLA2 humaine de groupe III ont été clonées chez D. melanogaster. Enfin, une sPLA2 humaine appartenant à un groupe structural nouveau (groupe XII) a été clonée. Les sPLA2 de mammifères ont une distribution tissulaire distincte. La sPLA2 de groupe IB est impliquée dans la digestion du bol alimentaire mais aussi dans d'autres fonctions. L'expression de la sPLA2 de groupe IIA augmente dans l'inflammation. La sPLA2 de groupe V semble jouer un rôle similaire à celui de la sPLA2 de groupe IIA. Les fonctions physiologiques des autres sPLA2 restent inconnues. L'utilisation de sPLA2 de venin a permis la caractérisation de deux types majeurs de récepteurs (M et N). Les sPLA2 se lient également à d'autres protéines, comme les protéoglycanes ou le facteur Xa de la coagulation, suggérant que les sPLA2 possèdent non seulement des fonctions d'enzyme mais aussi des fonctions de ligand. (...)
Implication in vivo des canaux potassiques dans les mécanismes moléculaires de la tolérance cérébrale by Nicolas Blondeau( Book )

2 editions published in 2001 in French and held by 2 WorldCat member libraries worldwide

Plus de 40 millions d'individus sont concernés par deux neuropathologies : l'ischémie cérébrale due à une réduction du débit sanguin et l'épilepsie résultants d'augmentation incontrôlée de l'activité neuronale. Du fait de leur implication dans nombre de fonctions physiologiques telles que la conduction cardiaque et l'excitabilité neuronale, les canaux potassiques (K+) sont de plus en plus considérés comme des cibles moléculaires d'un grand nombre d'états physiopathologiques. Le premier objectif de ce travail était d'étudier l'implication des canaux K+ sensibles à l'ATP dans la mort neuronale induite par ces deux pathologies, et plus particulièrement dans la tolérance cérébrale croisée, dans laquelle une courte période d'ischémie ou une épilepsie de faible intensité protège le cerveau d'une agression subséquente plus sévère. L'existence d'une telle tolérance a été démontrée. L'activation des récepteurs à l'adénosine de type A1 et celle des canaux KATP représentent une étape cruciale dans ce type de pré conditionnement. Ces activations sont interprétées par les neurones comme un signal de stress déclenchant la synthèse de protéines bénéfiques, comme HSP70. Le second objectif était d'analyser l'implication physiologique d'une nouvelle famille de canaux K+, les canaux K+ à deux domaines P, à la fois dans la neuroprotection immédiate et retardée. Enfin, l'étude de la signalisation intracellulaire induite par la tolérance ischémique, épileptique ou pharmacologique par des ouvreurs des canaux K+, a montré le rôle crucial du facteur de transcription NFkB dans ces processus de neuroprotection. Ces résultats in vivo renforcent l'idée qu'une stratégie thérapeutique basée sur l'activation de canaux K+ pourrait avoir un impact majeur dans le secteur de la santé publique
Implication du noyau latérodorsal du tegmentum dans les réponses au stress adaptatives et mésadaptées by Loïc Broussot( )

1 edition published in 2020 in English and held by 1 WorldCat member library worldwide

La réponse comportementale au stress est un mécanisme adaptatif qui permet à l'organisme de gérer les stimuli environnementaux nocifs. Les circuits qui la sous-tendent peuvent cependant être dérégulés par un stress intense ou chronique, conduisant à des troubles neuropsychiatriques. L'aire tegmentale ventrale (ATV) est une région du mésencéphale qui joue un rôle crucial dans le traitement de la récompense et l'aversion. On sait qu'elle influence la réponse au stress, mais notre connaissance sur ce rôle reste limitée car on ignore la plupart des structures régulatrices qui le sous-tendent. Le noyau latérodorsal du tegmental (LDTg) est une structure du tronc cérébral qui régule l'activité de l'ATV. Si son influence sur la récompense a été largement décrite, son rôle dans la réponse au stress reste encore inconnu.Cette thèse explore le rôle du LDTg dans deux types de réponse au stress : 1) Les comportements défensifs adaptés face à un stress aigu. 2) Les troubles comportementaux mésadaptés résultant d'un stress chronique. Pour comprendre le rôle du LDTg dans chacune, nous avons utilisé des outils pharmacogénétiques et optogénétiques pour moduler son activité durant des situations stressantes et en observer les effets comportementaux. En administrant de courts chocs électriques, nous avons évalué le rôle du LDTg dans un comportement défensif adaptatif d'immobilisation appelé freezing. Nous avons inhibé sélectivement les projections du LDTg de différentes natures et ciblant différentes structures afin de montrer que les projections GABAergiques du LDTg vers l'ATV régulent le freezing de manière bidirectionnelle. De la même façon, l'utilisation d'outils pharmacogénétiques dans un modèle de souris soumis à un stress social chronique nous a permis d'évaluer le rôle du LDTg dans des comportements de type dépressif. Les projections cholinergiques, mais pas glutamatergiques, du LDTg vers l'ATV sont ainsi nécessaires à l'induction des troubles de type dépressif par un stress chronique.En conclusion, ces résultats nous ont permis de mettre en évidence un rôle nouveau de l'axe LDTg-ATV dans la réponse au stress. Il est impliqué à la fois dans les réponses défensives adaptatives et les troubles comportementaux liés au stress. Ces informations pourraient aider dans le futur au développement de nouvelles thérapies innovantes basées sur la modulation des circuits cérébraux
Recherche de nouveaux antipaludiques par bioinformatique structurale et chémoinformatique : application à deux cibles : PfAMA1 et PfCCT by Émilie Pihan( )

1 edition published in 2013 in French and held by 1 WorldCat member library worldwide

Le paludisme est causé par cinq espèces du genre Plasmodium, P. falciparum étant le plus mortel. Des résistances de certaines souches du parasite ont été rapportées pour tous les médicaments mis sur le marché. Les moustiques vecteurs du parasite sont résistants aux insecticides et aucun vaccin n'est disponible. Cette maladie est un problème économique et de santé publique pour les pays en voie de développement. Mes travaux de thèses visent à identifier de nouveaux traitements contre le paludisme, en ciblant deux nouvelles protéines. Les Apicomplexes ont développé un mécanisme unique d'invasion, impliquant une interaction forte entre la cellule hôte et la surface du parasite, appelée jonction mobile. La caractérisation structurale et fonctionnelle du complexe AMA1-RON2 a ouvert la voie à la découverte de petites molécules capables d'empêcher l'interaction AMA1-RON2 et de ce fait, l'invasion. Le parasite a aussi besoin de phospholipides pour construire sa membrane durant le cycle érythrocytaire. Il y a six fois plus de phospholipides dans les érythrocytes infectés que dans les érythrocytes sains. Notre stratégie est d'inhiber la voie de synthèse de novo Kennedy et plus précisément, son étape limitante catalysée par la PfCCT. Des filtres basés sur le ligand (LBVS) et sur la structure (SBVS) ont été utilisés pour tester virtuellement les chimiothèques commerciales que j'ai préparées. Pour chaque projet, des molécules ont été sélectionnées pour leurs scores de docking et les interactions qu'elles établissent avec les résidus clés de la protéine. En combinant la bioinformatique structurale et la chémoinformatique, nous avons identifié des inhibiteurs potentiels des deux cibles protéiques
<> by Elvira Lopez-Perez( Book )

1 edition published in 2000 in English and held by 1 WorldCat member library worldwide

Fonctionnement des échangeurs phosphatidylsérine / phosphatidylinositol 4-phosphate à l'interface entre le réticulum endoplasmique et la membrane plasmique by Nicolas-Frédéric Lipp( )

1 edition published in 2020 in French and held by 1 WorldCat member library worldwide

Les protéines de transfert lipidique (LTPs) favorisent la solubilisation des lipides et assurent leur distribution entre des membranes biologiques distinctes. Les protéines Osh6p et Osh7p dans les cellules de levure et les protéines ORP5 et ORP8 dans les cellules humaines sont des LTPs homologues qui partagent une fonction commune : elles transportent la phosphatidylsérine (PS) depuis son lieu de synthèse, le réticulum endoplasmique (RE) vers la membrane plasmique où la PS est abondante et essentielle pour les fonctions cellulaires. Pour exécuter ce transport vectoriel, la PS est échangée contre un second lipide - le phosphatidylinositol 4-phosphate (PI(4)P) - qui est ensuite transporté en sens inverse depuis la membrane plasmique vers le RE. Dans la cellule, le PI(4)P est continuellement produit dans la membrane plasmique et dégradé dans le RE, respectivement par des PI 4 kinases et une PI-phosphatase, ce qui permet d'entretenir un gradient de concentration de PI(4)P constant entre les deux membranes. En exploitant ce gradient, Osh6p/Osh7p et ORP5/8 tirent l'énergie nécessaire à l'accumulation de PS dans la membrane plasmique.Avec Osh6p, le laboratoire a observé in vitro que ce mécanisme d'échange de lipides est très rapide et ceci est vérifié dans la levure. Ceci est sans doute suffisant pour approvisionner la membrane plasmique, dont la surface double en un temps de division cellulaire, avec la quantité appropriée de PS. Durant ma thèse, j'ai examiné deux aspects du mécanisme d'échange PS/PI(4)P. Premièrement, j'ai étudié comment Osh6p/Osh7p assurent le transport rapide de ces lipides à l'interface entre deux membranes, l'une étant légèrement anionique (le RE) et l'autre très anionique (la membrane plasmique). Deuxièmement, j'ai étudié ce qui permet à Osh6p et Osh7p de transporter la PS avec précision uniquement entre ces deux membranes dans la levure. Par des approches de biochimie, de reconstitution in vitro et de spectroscopie de fluorescence en temps réel, j'ai pu mettre en évidence, premièrement, qu'Osh6p, en changeant de conformation lors de la capture de la PS ou du PI(4)P, limitait son temps de rétention sur des membranes anioniques lors d'un processus d'échange, ce qui lui permet de l'effectuer rapidement. Deuxièmement, j'ai contribué à montrer qu'Osh6p effectuait des échanges précis, uniquement à l'interface RE/membrane plasmique, en interagissant avec le facteur d'attachement de membranes Ist2p. L'ensemble de ces études améliore notre compréhension des flux lipidiques dans la cellule et ouvre de nouvelles perspectives concernant la régulation de ces machineries essentielles au fonctionnement de la cellule
Les phospholipides polyinsaturés dans les larges déformations membranaires induites par les toxines bactériennes by Meng-Chen Tsai( )

1 edition published in 2020 in English and held by 1 WorldCat member library worldwide

Most cellular membranes contain phospholipids (PL) with saturated and mono-unsaturated acyl chains. However, polyunsaturated PL (PUPL) are abundant membrane components in some specialized cells, notably neurons and endothelial cells. Previously, we showed that docosahexaenoic acid (DHA), a polyunsaturated fatty acid that belongs to the omega 3 family, reduced the energy cost for membrane tubulation, thereby facilitating vesicle formation in endocytosis processes. Here, we investigate the effects of DHA in PL on two distinct bacterial invasion processes in endothelial cells, which rely on either RhoA GTPase inactivation or the activation of Rho GTPases. The first process is bacterial-toxin induced formation of transendothelial cell macroapertures (TEMs) or tunnels, which represents a novel path for bacterial extravasation in tissues through the endothelium. The second process is extraintestinal pathogenic Escherichia coli (ExPEC) invasion of endothelial cells. We modified the lipidic profile of PL in terms of acyl chains in Human Umbilical Vein Endothelial Cells (HUVEC) by defined fatty acid diets. Under DHA-diet conditions where the level of DHA-PL in the plasma membrane increased, we observed that the frequency of TEM openings increased in cells treated with the RhoA inactivating C3 exoenzyme from Clostridium botulinum. The facilitating effect on TEM nucleation was attributed to the thinner cell thickness resulting from DHA-PL enrichment. DHA-PL-enriched environment also triggered an increase of the density of TEMs that display smaller apertures and shorter lifetimes. The product of TEMs maximal size by their number remained constant, indicating the total area occupied by TEMs in a cell remains similar. We therefore show a homeostatic regulation in the host cell in order to balance the membrane tension to prevent cell rupture induced by bacterial toxins. As a broader evidence of the importance of PULP-levels in membranes, we found that increase of DHA-PL at the plasma membrane reduced bacterial toxin-induced invasion of endothelial cells by uropathogenic E. coli. Altogether, our results shed light on the role of DHA-containing PUPL on actin-driven large-scale plasma membrane deformations triggered by two families of bacterial toxins, which jeopardize Rho GTPase signaling to allow cell or tissue invasion by pathogenic bacteria
EFA6B régule un signal inhibiteur de l'invasion cellulaire : rôle dans le cancer du sein by Monserrat Vazquez Rojas( )

1 edition published in 2020 in English and held by 1 WorldCat member library worldwide

Étude des mécanismes moléculaires qui contrôlent l'interaction entre EFA6 et ses partenaires by Sonia Boulakirba( )

1 edition published in 2015 in French and held by 1 WorldCat member library worldwide

Exploration du profil clinique et génétique des patients atteints de schizophrénie précoce et de leurs apparentés au 1er degré - un protocole d'étude familiale et multicentrique en population française : Protocole GenAuDiss by Arnaud Fernandez( )

1 edition published in 2021 in French and held by 1 WorldCat member library worldwide

La schizophrénie précoce (SP) est une forme rare, sévère et neurodéveloppementale de schizophrénie débutant avant l'âge de 18 ans. Afin de mieux comprendre les bases génétiques complexes de ce trouble nous avons développé un projet pilote avec pour objectif principal de caractériser sur le plan clinique et génétique les patients atteints de SP. Compte tenu du chevauchement clinique et génétique de la SP avec les autres troubles neurodéveloppementaux, dont le Trouble du Spectre de l'Autisme (TSA) et le Trouble Déficit de l'Attention Hyperactivité (TDAH), nous avons porté une attention particulière aux gènes impliqués dans le neurodéveloppement.Il s'agit d'une étude multicentrique conduite d'avril 2014 à mai 2023. Les critères d'inclusion sont: âge de 7 à 22 ans, un diagnostic de SP (K-SADS-PL DSM-5) avec des symptômes autistiques prémorbides (ADI-R 0-5 ans) et un QI> 40; les parents et les frères et sœurs sont inclus. L'exploration du profil clinique a été effectuée à l'aide d'outils standardisés (KSADS-PL, PANSS) et a compris des évaluations neurocognitives (WISC-V/WAIS-IV). L'exploration génétique (approche hiérarchisée) a compris une recherche de l'X-Fragile, la réalisation d'un CGH-array puis, en cas de négativité des examens précédents, la réalisation d'un séquençage de l'ADN (exome) en trio. Nous avons procédé à la priorisation des gènes en combinant de multiples outils bio-informatiques.20 sujets ont été inclus: 15 Garçons et 5 filles. L'âge moyen de début du trouble était de 8,90 ans (+/-2,30). Les comorbidités psychiatriques étaient le TDAH (15/20 patients), les troubles anxieux (14/20) et le TSA (13/20). Le QI moyen était de 70,26 (+/-18,09). Un retard de langage et une rupture scolaire étaient notés chez 18/20 patients. L'affection somatique principale était l'asthme (15/20 patients). Sur le plan génétique, nous rapportons chez une patiente (ségrégation familiale) une duplication 10q26.3 (324 Kb) comprenant une partie du gène INPP5A. Nous avons montré que son homologue de la drosophile 5PtaseI est spécifiquement exprimée dans le système nerveux central. Enfin, grâce aux séquençages de l'ADN (9 exomes en trio ; mère, père, enfant soit 27 sujets) et aux outils bio-informatiques, nous avons identifié la présence de variants dans les gènes appartenant aux voies de signalisation Wnt, cadhérine et cholécystokinine.Ainsi, nous avons mis en évidence chez nos patients atteints de SP une grande hétérogénéité clinique avec des comorbidités psychiatriques et des atteintes neurodéveloppementales systématiquement associées. INPP5A est un gène exprimé dans le cerveau (humain, souris et drosophile), très conservé entre espèces et qui code une InsP3 5-phosphatase dont les produits d'hydrolyse mobilisent le calcium intracellulaire, essentiel pour la morphogenèse des épines dendritiques dans les neurones. L'altération de ce processus, par dysrégulation de la voie de signalisation InsP3/Ca2+, est retrouvée à la fois dans la schizophrénie et le TSA, renforçant le lien entre ces troubles. De plus, nous avons effectué la première description de l'implication potentielle de voies de signalisation Wnt, Cadhérine et Cholécystokinine dans la SP. L'implication de ces différentes voies de signalisation décrite de manière variable dans d'autres troubles neurodéveloppementaux et/ou psychiatriques souligne l'hétérogénéité génétique de ce trouble. Élucider les mécanismes moléculaires de la SP et ouvrir la voie à une intervention thérapeutique spécifique nécessitera d'effectuer systématiquement et à grande échelle : 1) le diagnostic syndromique précis de SP avec un âge exact de début de la maladie et le phénotype neurodéveloppemental associé ; 2) une évaluation génétique hiérarchisée allant jusqu'au séquençage du génome et 3) le partage des données à l'échelle internationale avec la constitution de bases de données spécifiques, comparables, génétiques et moléculaires corrélées aux phénotypes de précision des différentes formes de SP
Comment les lipides polyinsaturés facilitent les déformations membranaires by Marion Tiberti( )

1 edition published in 2019 in French and held by 1 WorldCat member library worldwide

Polyunsaturated phospholipids facilitate the deformation and fission of membrane by endocytosis proteins. It suggests a link between the striking enrichment of these lipids in neuronal plasma membranes and the fast endocytosis. In order to further explore the impact of polyunsaturated phospholipids on membrane deformation, molecular dynamics simulations are performed on model membranes in which the distribution of polyunsaturated chains is controlled in several ways. First, the acyl chain profile was systematically modified by introducing an increasing number of unsaturation on the acyl chains in position 1 and/or 2. In a second step, the distribution of polyunsaturated phospholipids was limited to only one leaflet of the membrane to mimic the asymmetric composition of biological membranes. These approaches have shown that (i) the vertical movements of acyl chains along the membrane increase with polyunsaturation and are responsible for the increasing flexibility of membranes; (ii) the mechanical effect of polyunsaturated phospholipids increases with the number of unsaturation, including a difference between chains 20 :4 (omega-6) and 22 :6 (omega-3) ; (iii) the combination of a saturated acyl chain and a polyunsaturated acyl chain in phospholipids allows a compromise between impermeability and membrane flexibility ; (iv) polyunsaturated phospholipids stimulate membrane deformation and fission if they are present in the outer leaflet to the deformation (i.e. cytosolic in the case of endocytosis) but they have no effect in the opposite leaflet. We propose a model in which polyunsaturated chains adapt their conformation to the curvature of the convex leaflet. These results are consistent with the distribution of polyunsaturated acyl chains in cell membranes
Stress réticulaire et maladie d'Alzheimer : contribution du facteur de transcription XBP-1s by Yannis Gerakis( )

1 edition published in 2016 in French and held by 1 WorldCat member library worldwide

La maladie d'Alzheimer est une pathologie neurodégénérative progressive liée à l'âge qui détériore premièrement les fonctions liées aux mémoires de travail et épisodiques, avant de s'étendre à l'ensemble des procédures mémorielles dans les stades plus avancés. L'ensemble des traitements existant à ce jour sont palliatifs. Au niveau histologique, la maladie d'Alzheimer est caractérisée par l'accumulation extra- et intracellulaire de différentes protéines agrégées (appelées amyloïde) dans les tissus cérébraux, entrainant des dysfonctions importantes du circuit neuronal. De fait, la majorité des approches thérapeutiques en développement consistent à tenter de réduire ou supprimer ces agrégats protéiques. Cependant, la maladie d'Alzheimer étant étroitement corrélée au vieillissement, certaines de ses caractéristiques biologiques sont parfois confondues avec celles du vieillissement non pathologique. L'une de ces caractéristiques est la diminution des différents mécanismes liés à l'homéostasie protéique (protéostasie). L'hypothèse réalisée au cours de mes travaux est que le rétablissement de ces mécanismes diminués par l'âge constituerait une approche thérapeutique crédible, complémentaire aux approches actuelles, à la pathologie complexe qu'est la maladie d'Alzheimer. C'est en suivant cette optique que je me suis intéressé au rôle et à la régulation de l'un des systèmes majeusr du contrôle de la protéostasie : l'UPR (unfolded protein response), et en particulier au facteur de transcription XBP-1s, considéré comme l'une des pièces maîtresses de ce réseau de signalisation cellulaire
Le rôle de la signalisation calcique dans le Syndrome de l'X fragile by Sara Castagnola( )

1 edition published in 2019 in English and held by 1 WorldCat member library worldwide

Le syndrome de l'X fragile (FXS) est la forme héréditaire la plus commune de retard mental (RM) et la première cause de troubles du spectre de l'autisme (TSA). Il est causé par la perte d'expression du gène FMR1 qui code la protéine Fragile X Mental Retardation Protein (FMRP). FMRP est une protéine capable de se lier aux ARNs, et elle est impliquée dans différentes étapes du métabolisme de l'ARN allant du transport des ARNs au contrôle de la traduction des ARNm au niveau du soma et des synapses. Pour identifier les différents ARNm ciblés par FMRP, nous avons séquencé à haut-débit les ARNs isolés par « crosslinking » immunoprécipitation (HITS-CLIP ou CLIP-seq). Cette technique nous a permis d'identifier 1065 ARNm liés par FMRP avec une forte affinité. Un nombre remarquable de ces ARNm code des régulateurs de l'homéostasie ionique, et plus particulièrement l'homéostasie calcique. A partir de ces données, j'ai développé le premier axe de ma thèse, ciblé sur la compréhension de l'homéostasie du Ca2+ dans le FXS. Je me suis plus particulièrement focalisée sur l'une des cibles principales de FMRP, appelée Cacna1a. Ce gène code la sous-unité formant le pore du canal calcique voltage-dépendant de type P/Q (VGCC) Cav2.1, qui est localisé dans les neurones au niveau du compartiment somato-dendritique et de l'axone. Le canal Cav2.1 laisse entrer le calcium dans le cytosol des neurones lors de la dépolarisation de la membrane, et de nombreux changements intra-cellulaires découlent de cet influx de calcium, en particulier la libération de neurotransmetteurs et la transcription calcium-dépendante. Mon but était d'analyser la corrélation entre l'absence de FMRP et l'expression de Cacna1a dans des cultures primaires de neurones afin de déterminer le rôle de ce gène et de cette protéine dans la physiopathologie du FXS. Pour cela, j'ai réalisé une analyse fonctionnelle de la régulation calcique en utilisant une méthode d'imagerie calcique sur des neurones en culture Fmr1Knock-Out (KO) corticaux et hippocampaux. J'ai ainsi pu observer que ces neurones ont un influx de calcium plus faible et plus lent que les neurones sauvages (WT) en réponse à une dépolarisation KCldépendante. De plus, j'ai également montré que la protéine codée par Cacna1a a une activité et une synthèse réduite à la membrane plasmique des souris Fmr1-KO par rapport aux wild-type (WT). Mes résultats mettent donc en évidence un nouveau phénotype pour les neurones Fmr1-KO en culture et montrent que le défaut d'homéostasie calcique est un nouveau biomarqueur de ce modèle cellulaire. Dans le second axe de mon travail, j'ai étudié le rôle de l'homéostasie calcique dans les différentes populations cellulaires qui composent le cerveau en présence et en absence de FMRP. Pour mieux décrire la diversité des différents types cellulaires observés en imagerie calcique et définir quelles caractéristiques moléculaires appartiennent à chaque sous-groupe neuronal, j'ai développé un nouvel outil d'analyse appelé aiFACS pour «agonist-induced Functional Analysis and Cell Sorting». Cette technique permet de stimuler individuellement les neurones et d'analyser leur réponse à un agoniste pharmacologique et de les trier simultanément. Différentes analyses «-omics» permettent ensuite de définir l'identité des différentes cellules et les éléments moléculaires qui caractérisent la réponse des neurones WT par rapport aux Fmr1-KO. Grâce à cette méthode, j'ai mis en évidence une dérégulation de l'excitabilité des interneurones, ce qui permet de mieux caractériser le schéma chimique du cerveau de ces souris
 
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Institut de Pharmacologie Moléculaire et Cellulaire facility in Valbonne, France

IPMC

Université Côte d'Azur. Institut de pharmacologie moléculaire et cellulaire

Université de Nice. Institut de pharmacologie moléculaire et cellulaire

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