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Midoux, Patrick (1954-....).

Overview
Works: 29 works in 40 publications in 2 languages and 45 library holdings
Genres: Academic theses 
Roles: Thesis advisor, Author, Opponent, Other, Contributor
Classifications: QH345, 616.994
Publication Timeline
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Most widely held works by Patrick Midoux
INTERACTIONS : PROTEINE-SUCRE. ETUDE SPECTROSCOPIQUE DES INTERACTIONS ENTRE LA LECTINE DU GERME DE BLE (WGA) ET DES DERIVES DE LA N-ACETYL-D-GLUCOSAMINE by Patrick Midoux( )

4 editions published in 1980 in French and held by 5 WorldCat member libraries worldwide

Interactions: protéine-sucre by Patrick Midoux( Book )

2 editions published in 1980 in Undetermined and French and held by 3 WorldCat member libraries worldwide

Ciblage de cytotoxiques et d'immunostimulants par des anticorps monoclonaux et des néoglycoprotéines by Patrick Midoux( Book )

3 editions published in 1987 in French and held by 3 WorldCat member libraries worldwide

THERAPIE GENIQUE : AUGMENTATION DE LA SPECIFICITE ET DE LA PERSISTANCE DU TRANSGENE APRES TRANSFERT DE GENES A L'AIDE DE VECTEURS NON VIRAUX (POLYLYSINES GLYCOSYLEES) by Valérie Boutin( Book )

2 editions published in 1998 in French and held by 2 WorldCat member libraries worldwide

Dans le cadre des recherches realisees en glycobiologie au centre de biophysique moleculaire a orleans, nous avons utilise des complexes adn/polylysines glycosylees pour transfecter des genes dans des cellules musculaires vasculaires lisses spontanement immortalisees derivees d'aorte de lapin (cellules rb-1) de facon selective et par une methode non virale. Dans le but d'augmenter la specificite de la transfection, nous avons montre que la transfection depend de la densite des cellules pendant la transfection, du temps de contact entre les complexes et les cellules, de la quantite de plasmide utilisee, de la nature de l'agent de passage transmembranaire et de la nature du substituant osidique de la polylysine dans le cas ou l'agent de passage transmembranaire est un peptide fusiogene. Dans le but d'augmenter la persistance du transgene dans les cellules rb-1 apres le transfert par des methodes non virales, nous avons explore deux voies. La premiere approche consiste en l'utilisation de differentes formes topologiques de l'adn. A efficacite de penetration egale dans les cellules rb-1, nous avons montre que les complexes faits avec les molecules lineaires sont respectivement 9 et 150 fois plus efficaces pour l'obtention de clones stables que ceux faits avec les concatemeres ou les molecules circulaires surenroulees. Mais, nous avons egalement montre que les complexes faits avec les molecules circulaires surenroules penetrent beaucoup plus facilement dans les cellules rb-1 que les autres. La seconde approche du probleme est d'ajouter au systeme de transfection developpe au laboratoire des activites enzymatiques utiles pour la perpetuation des acides nucleiques, et en particulier l'integrase de mo mulv, ajoutee sous forme plasmidique aux complexes. Bien qu'in vitro, l'integrase assure l'integration d'un adn matrice dans un adn cible de facon efficace et stable, in vivo, le systeme semble plus complique avec peut etre un effet toxique de l'integrase
Muramyl dipeptide bound to poly-l-lysine substituted with mannose and gluconoyl residues as macrophage activators by Danièle Derrien( )

1 edition published in 1989 in English and held by 2 WorldCat member libraries worldwide

Tumor localization of Lewis lung carcinoma with radiolabeled monoclonal antibodies by Patrick Midoux( )

1 edition published in 1984 in English and held by 2 WorldCat member libraries worldwide

Transport transendothélial de gènes : études dynamiques du passage sélectif de polyplexes à travers l'endothélium vasculaire pulmonaire by Eric Mennesson( Book )

2 editions published in 2005 in French and held by 2 WorldCat member libraries worldwide

L'administration systémique de gènes représente une voie intéressante pour le traitement par thérapie génique de la mucoviscidose ou des cancers pulmonaires. Dans cette optique, les polyplexes (complexes ADN/polymère cationique) doivent traverser les vaisseaux sanguins pulmonaires pour atteindre les cellules cibles. L'objectif de ce travail était d'étudier le passage transendothélial de polyplexes formés avec la polylysine histidylée (pLK-His) et la polyéthylènimine (PEI). Pour cela, nous avons mis au point un modèle d'endothélium microvasculaire pulmonaire. Ces travaux montrent que la polarisation des cellules endothéliales (ECs) diminue l'internalisation et l'efficacité de transfection des polyplexes pLK-His mais pas celles des polyplexes PEI. De plus, les polyplexes pLK-His et PEI sont capables de traverser la monocouche de ECs et transfecter des cellules épithéliales. L'incubation des ECs avec des cytokines pro-inflammatoires permet d'augmenter ce passage. Enfin, l'adhésion des polyplexes sur les ECs est plus importante dans les conditions de flux des microvaisseaux que dans les conditions de flux des veines. Des polyplexes formés avec une PEI sur laquelle a été greffée des motifs de tétraglucose spécifiques des ECs adhèrent trois fois plus que les polyplexes PEI ce qui montre un ciblage des ECs pulmonaires en conditions de flux. L'ensemble des résultats montre qu'il est indispensable de mieux considérer les effets des conditions physiologiques des cellules (polarisation, effets du flux sanguin, conditions d'inflammation) sur la transfection pour concevoir de nouveaux vecteurs synthétiques efficaces in vivo
Exogenous mRNA delivery and bioavailability in gene transfer mediated by piggyBac transposition by Solenne Bire( )

1 edition published in 2013 in English and held by 2 WorldCat member libraries worldwide

Transfert d'acides nucléiques à l'aide de polylysine histidylée et/ou glycosylée : synthèse des polymères et études physicochimiques by Mahajoub Belcym Bello Roufaï( Book )

2 editions published in 2001 in French and held by 2 WorldCat member libraries worldwide

La polylysine (pLK) de 190 résidus substituée à 45-60 % sur les fonctions ?-NH2 par des résidus histidyles (la His-pLK) a été proposée comme vecteur pour le transfert de gène. Elle permet de s'affranchir de l'utilisation d'auxiliaires de passage transmembranaires comme la chloroquine ou les peptides fusiogènes. Nous avons montré que ce système était aussi efficace pour le transfert d'oligonucléotides lorsque la taille de la polylysine était réduite à 19 résidus et qu'elle était substituée par une quinzaine de résidus histidines. Dans le but d'une extension in vivo du système, les caractéristiques physicochimiques des complexes His-pLK/ADN ainsi que l'influence des paramètres physiologiques sur ces caractéristiques ont été étudiées. Ces études nous ont permis de montrer que : 1- la substitution de la pLK par des résidus histidyles permettait de réduire les forces d'interaction et de stabilisation des complexes tout en compactant l'ADN en des particules de 100 à 110 nm de diamètre ayant une charge globale de surface (potentiel ?) positive. Bien que l';histidine soit liée sur la chaîne latérale de la lysine, induisant un léger encombrement, la His-pLK induit sur l'ADN une modification structurale similaire à celle induite par la pLK ; 2- le mode d’action de la His-pLK repose sur la protonation des noyaux imidazoles des résidus histidyles, nous avons montré que cette protonation dans un complexe histidylé a lieu au pH des endosomes précoces ; 3- les complexes histidylés qui s'agrègent en milieu salin, ont en présence de sérum une taille moyenne inférieure à 100 nm et un potentiel ? négatif suite à l'adsorption de protéines sériques. La réduction de taille et l'inversion du potentiel ? n'influencent pas le niveau d'expression d'un gène rapporteur ; 4- il est possible de cibler le transfert de gène par la His-pLK en lui substituant des oses simples ; l'efficacité de la transfection dépend du temps d'incubation des cellules en présence des complexes et est fonction du type cellulaire. Ayant observé que la nature de l'ose fixé sur la His-pLK a une influence sur l'agrégation des complexes cationiques, nous avons montré qu'un motif maltosyle permet d'éviter ce phénomène en milieu salin. La substitution à 5% de la pLK par du maltose permet de stabiliser le complexe formé même lorsque la force ionique atteint 0.15 M NaCl. Nos travaux ont permis d'élucider les caractéristiques physicochimiques des complexes histidylés et ouvrent la voie à des études in vivo
THERAPIE GENIQUE : TRANSFERT NON VIRAL DE GENES ET CIBLAGE PAR DES COMPLEXES ADN/POLYLYSINE GLYCOSYLEES ET/OU GLUCONOYLEES by Patrick Erbacher( Book )

2 editions published in 1996 in French and held by 2 WorldCat member libraries worldwide

NOUS AVONS DEVELOPPE DES POLYLYSINES GLYCOSYLEES ET UTILISE DES COMPLEXES AND/POLYLYSINE GLYCOSYLEE POUR TRANSFERER DES GENES DANS DES CELLULES ANIMALES DE FACON SELECTIVE PAR UNE METHODE NON VIRALE. CES COMPLEXES ADN/POLYLYSINE GLYCOSYLEE SONT SPECIFIQUEMENT ENDOCYTES APRES LEUR RECONNAISSANCE PAR DES LECTINES MEMBRANAIRES PRESENTES A LA SURFACE DE CELLULES CIBLES. NOUS AVONS MONTRE QUE DES TRANSFECTIONS EFFICACES SONT OBTENUES LORSQUE: A) LES COMPLEXES SONT FORMES AVEC LE PLUS PETIT RAPPORT MOLAIRE POLYLYSINE GLYCOSYLEE/ADN QUI INDUIT UN RETARD TOTAL DE MIGRATION DE TOUT L'ADN APRES ANALYSE ELECTROPHORETIQUE ET QUI PERMET UNE FIXATION TOTALE DE LA POLYLYSINE GLYCOSYLEE SUR L'ADN, B) LE TAUX DE SUBSTITUTION DE LA POLYLYSINE PAR DES RESIDUS OSIDIQUES EST RESPECTIVEMENT DE 31 4% ET 40 8% POUR UN DISACCHARIDE ET UN DISACCHARIDE, CE QUI PERMET DE CONTROLER LA FORCE DE L'INTERACTION ELECTROSTATIQUE ENTRE LE PLASMIDE ET LA POLYLYSINE GLYCOSYLEE ET LA STABILITE DES COMPLEXES, C) DES LECTINES MEMBRANAIRES SONT PRESENTES A LEUR SURFACE DE CELLULES CIBLES TELLES QUE DES MACROPHAGES HUMAINS, DES HEPATOMES HUMAINS OU DES CELLULES ENDOTHELIALES DE RAT, ET D) LES TRANSFECTIONS SONT REALISEES EN PRESENCE DE CHLOROQUINE QUI COMME NOUS L'AVONS MONTRE DISSOCIE DANS UN SYSTEME ACELLULAIRE LES COMPLEXES ADN/POLYLYSINE GLYCOSYLEE EN PLUS DE LA NEUTRALISATION ET DE LA VACUOLISATION DES VESICULES INTRACELLULAIRES FAVORISANT UN PASSAGE TRANSMEMBRANAIRE DE L'ADN VERS LE CYTOSOL. SUR LA BASE DE CES RESULTATS, NOUS AVONS DEVELOPPE UNE POLYLYSINE PARTIELLEMENT GLYCONOYLEE, UN NOUVEAU TRANSPORTEUR DE GENES, PERMETTANT DE FORMER DES COMPLEXES HAUTEMENT SOLUBLES AVEC L'ADN ET POUVANT ETRE SUBSTITUEE PAR UN PETIT NOMBRE DE SIGNAUX DE RECONNAISSANCE DE NATURE OSIDIQUE OU PEPTIDIQUE OU AUTRE. LES RESULTATS OBTENUS AU COURS DE CE TRAVAIL OUVRENT DES PERSPECTIVES TRES PROMETTEUSES QUANT A L'UTILISATION DE LA POLYLYSINE GLYCOSYLEE POUR DELIVRER DES GENES D'INTERET THERAPEUTIQUE DANS DES CELLULES ANIMALES
PEPTIDE FUSIOGENE ET POLYMERES POLYCATIONIQUES : SYNTHESE ET ETUDES DE L'INTERNALISATION ET DES EFFETS SUR LE PASSAGE TRANSMEMBRANAIRE D'ACIDES NUCLEIQUES by Christina Pellerin Mendes( Book )

2 editions published in 1993 in French and held by 2 WorldCat member libraries worldwide

DEPUIS PLUSIEURS ANNEES SE DEVELOPPENT DE NOUVELLES STRATEGIES THERAPEUTIQUES FONDEES SUR LE CIBLAGE DE MOLECULES D'INTERET BIOLOGIQUE (EN PARTICULIER DES GENES ET DES OLIGONUCLEOTIDES ANTISENS) POUR AUGMENTER LEUR SELECTIVITE ET LEUR PENETRATION DANS DES CELLULES CIBLES. LE CIBLAGE A POUR BUT D'AUGMENTER LA PENETRATION DE CES MOLECULES DANS LE COMPARTIMENT INTRACELLULAIRE OU ELLES DOIVENT AGIR, C'EST A DIRE DANS LE CYTOSOL ET/OU LE NOYAU, DANS LE CAS DES GENES ET DES OLIGONUCLEOTIDES ANTISENS. LES ACIDES NUCLEIQUES SONT FIXES OU ASSOCIES A DES GLYCOCONJUGUES RECONNUS PAR DES LECTINES MEMBRANAIRES QUI INDUISENT LEUR INTERNALISATION SPECIFIQUE PAR VOIE D'ENDOCYTOSE. IL A ETE MONTRE QUE, PAR CE PROCESSUS, LES ACIDES NUCLEIQUES CIBLES SE CONCENTRENT DANS DES VESICULES INTRACELLULAIRES (ENDOSOMES ET LYSOSOMES) DONT LE PH EST ACIDE. CEPENDANT POUR ATTEINDRE LEUR CIBLE ET AVOIR UN EFFET BIOLOGIQUE, LES ACIDES NUCLEIQUES DOIVENT TRAVERSER LA MEMBRANE DES ENDOSOMES POUR PENETRER DANS LE CYTOSOL, AVANT D'ATTEINDRE LES LYSOSOMES, OU ILS SERONT DEGRADES. AFIN DE FAVORISER UN PASSAGE TRANSMEMBRANAIRE A PARTIR DES ENDOSOMES DANS LE CYTOSOL, NOUS AVONS ELABORE DEUX STRATEGIES FONDEES SUR L'UTILISATION DE POLYPEPTIDES, TELS QUE LA POLYHISTIDINE, ET DE PEPTIDES, CONNUS POUR AVOIR DES PROPRIETES FUSIOGENES EN MILIEU ACIDE, LESQUELS DEVRAIENT PERMETTRE DE DESTABILISER LA MEMBRANE DES VESICULES D'ENDOCYTOSE ET FAVORISER UN PASSAGE TRANSMEMBRANAIRE DANS LE CYTOSOL. DANS UN PREMIER TEMPS, NOUS AVONS SYNTHETISE DES POLYMERES POLYIMIDAZOLES NEUTRES CONTENANT DES RESIDUS HISTIDYLES OU 4-ACETYL IMIDAZOLES, QUI EN SE PROTONANT A PH < 6, DEVIENNENT POLYCATIONIQUES. NOUS AVONS MONTRE QUE LE POLYMERE POLYIMIDAZOLE EST FAIBLEMENT INTERNALISE PAR CES CELLULES DANS DES VESICULES ACIDES ET QUE LE POLYMERE CIBLE EST INTERNALISE PLUS EFFICACEMENT QUE LE POLYMERE LIBRE DANS LE CAS DES CELLULES J774E. DANS UN SECOND TEMPS, NOUS AVONS SYNTHETISE UN PEPTIDE DOUE DE PROPRIETES FUSIOGENES A PH LEGEREMENT ACIDE. NOUS AVONS MONTRE QUE LE PEPTIDE FUSIOGENE EST FORTEMENT INTERNALISE ET QU'IL SE CONCENTRE DANS DES VESICULES INTRACELLULAIRES. DE PLUS, L'UTILISATION DU PEPTIDE FUSIOGENE, COMME AGENT DESTABILISATEUR DES MEMBRANES DES VESICULES D'ENDOCYTOSE, AUGMENTE TRES FORTEMENT L'EFFICACITE DE TRANSFECTION DES CELLULES HEPG2 PAR UN COMPLEXE PLASMIDE/POLY-L-LYSINE LACTOSYLEE RECONNU ET INTERNALISE VIA LA LECTINE MEMBRANAIRE DE CES CELLULES. CES RESULTATS OUVRENT DES PERSPECTIVES INTERESSANTES DANS LE DOMAINE DE L'UTILISATION DES ACIDES NUCLEIQUES COMME AGENTS THERAPEUTIQUES ET EN PARTICULIER POUR L'UTILISATION DES GENES EN THERAPIE GENIQUE
Développement, formulation et biodistribution de vecteurs synthétiques pour le transfert de gènes dans le cadre de la thérapie génique de la mucoviscidose by Nawal Belmadi( )

1 edition published in 2015 in French and held by 1 WorldCat member library worldwide

La mucoviscidose est une maladie monogénique, caractérisée par des mutations survenant au niveau du gène CFTR (Cystic Fibrosis Transmembrane Conductance Regulator). Le clonage en 1989 du gène CFTR a permis d'envisager de traiter cette maladie par thérapie génique. Cela consiste à transférer à l'aide d'un vecteur, une version normale du gène CFTR dans les cellules atteintes des patients. En raison de la gravité des complications pulmonaires, c'est l'épithélium respiratoire qui constitue aujourd'hui le tissu cible pour le transfert de gènes. Le principe de la thérapie génique est évidemment très séduisant et un certain nombre d'essais cliniques ont d'ores et déjà été réalisés. La thérapie génique nécessite des outils de vectorisation efficaces et compatibles avec une utilisation répétée en clinique.Mon sujet de thèse a porté donc sur le développement, la biodistribution et l'optimisation de vecteurs synthétiques (lipides cationiques) pour le transfert de gènes dans l'épithélium respiratoire. Au cours de mes travaux, nous avons donc pu mettre au point des lipophosphoramidates KLN47 fluorescents utiles pour les études de biodistribution in vivo. Comparés au KLN47 non fluorescent, ces nouveaux composés présentent les mêmes propriétés physicochimiques, à savoir une taille relativement petite et un potentiel zêta positif. Sur lignées cellulaires, nous avons montré que les nouvelles formulations étaient aussi efficaces que le KLN47, et pas ou peu toxiques. Ensuite, sur modèle animal, les profils de biodistribution de lipoplexes pégylés et non-pégylés ont été comparés après injection systémique. Les profils de biodistribution des lipoplexes pégylés et non-pégylés étaient similaires, cependant, la pégylation des complexes a conduit à une circulation prolongée dans la circulation sanguine, alors que l'expression du transgène (luciférase) était équivalente dans les deux cas. De plus, l'activité luciférase était similaire à celle obtenue avec le KLN47 non fluorescent. Nous avons ainsi démontré que l'ajout des sondes lipidiques fluorescentes dans la solution liposomale du KLN47, ne modifie pas ses propriétés physicochimiques et transfectantes. L'ensemble des résultats montre que nous disposons d'outils prometteurs pour les études de biodistribution in vivo. D'autres molécules ont également été testées avec succès
Synthèse de nouveaux vecteurs cationiques à architecture en étoile pour le transfert de gènes by Laëtitia Plet( )

1 edition published in 2019 in French and held by 1 WorldCat member library worldwide

Some rare diseases of genetic origin can be treated by a therapy called "gene therapy" which consists in introducing a polynucleotide (DNA or RNA) into the cells to modulate their activity for therapeutic purposes. The use of a vector able to protect the polynucleotide and to transport it to the nucleus of the target cells is necessary. Polyethyleneimine (PEI) is currently the cationic polymer gold standard in this field. However, due to its high toxicity, many studies aiming to modify PEI are still underway to improve its properties. Among other things, it has been shown that compact architectures give better properties to polymers. In this context, star PEI were synthesized for the first time. To this end, star poly(2-oxazoline)s precursors were prepared and their architecture was confirmed by steric exclusion chromatography analyses and kinetic studies. PEI of variable molar mass (8, 16 and 25 K) and architecture (linear, 3 and 4 arms star) were then obtained by adapting the hydrolysis protocol used for linear polymers. The transfection of CFBE and HepG2 cells with polyplexes based on pDNA and these polymers was evaluated. The influence of molar mass and architecture was studied. Finally, the modification of these PEI with histidine moieties known to increase lPEI transfection efficiency was successfully achieved, however, the expected synergy between the chemical and architectural modifications was not observed for the in vitro transfection of HepG2 cells
Transfert de gènes non-viral à destination des muscles squelettiques par injection hydrodynamique via la veine saphène : pistes d'optimisations et mise en application chez la souris by Yann Le Guen( )

1 edition published in 2019 in French and held by 1 WorldCat member library worldwide

L'injection hydrodynamique par la veine (HLV) est une méthode physique d'administration locorégionale utile en transfert de gènes. Elle permet en effet de cibler l'ensemble de la musculature d'un membre isolé par un garrot via la délivrance d'un volume important contenant des constructions d'acides nucléiques d'intérêt complexés ou non à des vecteurs synthétiques. Cette approche a pour avantages de conserver son efficacité du petit au grand animal tout en étant cliniquement applicable. Elle se révèle donc attractive pour le traitement par thérapie génique de myopathies comme celle de Duchenne. Lorsqu'utilisée dans sa configuration originelle, l'injection HLV permet de transfecter de l'ADN nu avec une certaine efficacité. Cependant, les niveaux de transfection obtenus de la sorte sont limités et insuffisants pour conférer un réel bénéfice thérapeutique. Dans ce contexte, ce travail s'est premièrement intéressé à l'identification des étapes potentiellement limitantes pour le transfert de gènes par administration HLV. Différentes pistes d'optimisations ont été proposées et ensuite testées en utilisant la souris en tant qu'animal modèle. Ainsi, divers vecteurs synthétiques ont été utilisés, notamment des copolymères tribloc amphiphiles neutres, pouvant aider au franchissement du sarcolemme des fibres musculaires. De même, une série d'ADN plasmidiques comportant des séquences spécifiques pouvant faciliter l'étape de l'import nucléaire (appelées « DNA nuclear Targeting Sequences » ou DTS) a été mise au point et évaluée en exploitant la procédure HLV
Compréhension immunologique de la stimulation de la réponse immunitaire par des molécules synthétiques : applications thérapeutiques by Thibault Colombani( )

1 edition published in 2017 in French and held by 1 WorldCat member library worldwide

The development 01 biotherapies experienced an unprecedented growth in recent years, allowing the emergence al many therapeutic solutions to many challenges in human and animal health in arder to fight against hereditary or acquired diseases. Among these strategies, gene transfer is of particular interest, making it possible either to repair defective cells by providing them a healthy copy 01 the gene, ar to effectively activate the immune system by expressing an antigen of therapeutic interest. Nevertheless, despite the development of numerous tools for gene therapy or immunotherapy, many limitations persist. During this thesis, the results obtained allowed the development and optimization of tools in order to go beyond these limits. First, we have been able to elucidate the mechanism of action 01 the block copolymer 704, a new class 01 vectors which allows to induce an optimal vaccine response by directly delivering nucleic acids into muscle cells and by stimulating intracellular DNA sensors. Moreover, this work has demonstrated that a new class of adjuvant molecules, lipoaminoglycosides, can stimulate efficiently the immune system in addition to lead to the regression of murine mammary tumors growth. Finally, these results showed the importance of the supramolecular assembly of lipoplexes on the ransfection efficiency in order to develop a universal vector for the delivery of different classes of nucleic acids. Therefore, the optimization of macromolecules delivery within cells and the understanding of the interaction between the immune system i vector I nucleic acids allowed us to establish strategies in order to develop specific formulations tor each biotherapeutic applications
Poly(N-methylvinylamine)-Based Copolymers for Improved Gene Transfection( )

1 edition published in 2018 in English and held by 1 WorldCat member library worldwide

Abstract: Poly(N -methylvinylamines) with secondary amines can form complexes with plasmid DNA (pDNA) and provide transfection efficiency in HeLa cells in the same order as linear polyethyleneimine but with higher cell viability. Chemical modifications of poly(N -methylvinylamine) backbones are performed to further improve transfection efficiency while maintaining low degree of cytotoxicity. In a first type of polymer, primary amino groups are incorporated via a copolymerization strategy. In a second one, primary amino and imidazole groups are incorporated also via a copolymerization strategy. In a third one, secondary amino groups are substituted with methylguanidine functions through a postpolymerization reaction. Thus, novel polymers of various molecular masses are synthesized, characterized, and their interaction with pDNA studied. Then, their transfection efficiency and cytotoxicity are tested in HeLa cells. Two polymethylvinylamine-based copolymers, one containing 20% of imidazole moieties and another one composed of 12% of guanidinyl units allow remarkable transfection efficiency of HeLa, pulmonary (16HBE), skeletal muscle (C2C12), and dendritic (DC2.4) cells. Overall, this work thus identifies new promising DNA carriers and chemical modifications that improve the transfection efficiency while maintaining low degree of cytotoxicity. Abstract : Chemical modifications of poly(N -methylvinylamines) backbones are performed to further improve transfection efficiency while maintaining low degree of cytotoxicity. Two polymethylvinylamine-based copolymers, one containing 20% of imidazole moieties and another one composed of 12% of guanidinyl units allow remarkable transfection efficiency of HeLa, pulmonary (16HBE), skeletal muscle (C2C12), and dendritic (DC2.4) cells
Interactions moléculaires et cellulaires entre les protéines E3-14.7K, FIP-1 et les microtubules : application dans le transfert de gènes by Lucie Pigeon( )

1 edition published in 2012 in French and held by 1 WorldCat member library worldwide

L'objectif de la thérapie génique est de guérir des déficiences génétiques et de nombreuses maladies acquises par l'introduction d'acides nucléiques dans les cellules mammifères. Les vecteurs chimiques sont une alternative aux vecteurs viraux pour le transfert de gène, leur immunogénicité est réduite, en plus de leur faible coût et de la facilité de leur production. Jusqu'à présent, les liposomes et les polymères cationiques sont les vecteurs chimiques les plus étudiés et utilisés pour le transfert d'ADN plasmidique (ADNp) thérapeutique. Parmi les multiples barrières biologiques, la diffusion cytosolique limitée de l'ADNp est critique pour le niveau d'expression du transgène. Le but de ce travail de thèse était d'identifier un peptide de liaison à la dynéine, qui serait capable de recruter la protéine motrice dynéine et de faciliter le transport d'ADNp vers le noyau le long des microtubules. Nous avons donc étudié le réseau d'interaction de la protéine adénovirale E3-14.7K. E3-14.7K est indirectement en interaction avec la chaîne légère de la dynéine TCTEL1 par l'intermédiaire de FIP-1. Différentes techniques ont été utilisées pour analyser les interactions de ces différentes protéines telles que Bioluminescence Resonance Energy Transfer (BRET), Förster Resonance Energy Transfer (FRET), Fluorescence Lifetime Imaging (FLIM), immunoprécipitation et Laser Scanning Confocal Microscopy (LSCM). La technique de BRET nous a permis d'identifier un peptide de 20 acides aminés d'E3-14.7K (P79-98) responsable de son interaction avec FIP-1. Associé à des Quantum Dots P79-98 (P79-98-Qdot) colocalise avec les microtubules isolés et dans les cellules HeLa. Nous avons mis au point une méthode de greffage du peptide directement sur l'ADNp. Une fois greffé avec P79-98 l'ADNp est capable d'interagir avec les microtubules dans les cellules HeLa et de migrer activement jusqu'au noyau. P79-98 améliore l'efficacité de la transfection des HeLa jusqu'à 77%
Formulation de nanoparticules d'ADN fonctionnalisées par des peptides ligands des chaînes LC8 de la dynéine pour améliorer le trafic intracellulaire dans le transfert de gènes non viral by Coralie Charrat( )

1 edition published in 2016 in French and held by 1 WorldCat member library worldwide

The aim consists in engineering DNA carriers functionalized by peptide sequences, DLC8-AS, targeting the LC8 light chains of cytoplasmic dynein, to promote active transport towards the nucleus along the microtubules (MTs).Dépôt de thèseDonnées complémentairesPrevious works based on polystyrene fluospheres functionalized with DLC8-AS, showed a noteworthy transfection enhancement but as a cost of high levels of ligands. Such levels of functionalization are unsuitable for maintaining sufficient colloidal stability of DNA nanoparticles (NPs). In order to compensate for this, we developed in this thesis weakly functionalized DNA NPs (2-10 mol %) bearing dimers of DLC8-AS to benefit from a dimeric effect toward the dynein which increase the affinity. Among our designed systems, two revealed the benefit from taking advantage from the dimeric effect of DLC8-AS. The 1st one relies on a cationic and dimerizable cysteine based amphiphile, which was used with its dimerizable pegylated homologue containing DLC8-AS, to produce, through a thiol-disulfide oligomerisation process, a monodisperse population of small sized functionalized DNA NPs (~60 nm). Experiments carried out onto HeLa cells, showed that DNA NPs functionalized with DLC8-AS dimers exhibited enhanced transfection properties (~250 times) through a dynein/MTs dependant mechanism. The second consists in functionalizing the surface of PEI polyplexes with octaarginine amphiphiles carrying a mono- or bis-DLC8-AS. Remarkably, the transfection efficiency of polyplexes bearing the dimeric ligands was increased by a 50 times factor compared to the JetPEI golden standard. Here too, the mechanism strongly depends on MTs
Vectorisation d'acides nucléiques dans le muscle squelettique à des fins thérapeutiques by Debborah Alimi-Guez( )

1 edition published in 2009 in French and held by 1 WorldCat member library worldwide

There are two types of vectorization techniques of DNA, viral vectors and nonviral. Among non-viral strategies, we can distinguish those based on physical techniques, those using uncharged molecules, and those that are most used, namely approaches using cationic compounds. The uncharged amphiphilic copolymers, composed of units of polyethylene oxide (POE) and polypropylene oxide (PPO), can improve the efficiency of transfection in muscle. To better understand what properties are required to have an efficient gene transfer, we decided to study structure-activity. We showed that all tested poloxamers increase expression in muscle significantly compared to injection of naked DNA. This shows that there is not a single compound to improve gene transfer into muscle but there is great flexibility in terms of molecular weight and ratio of hydrophilic / hydrophobic. In parallel, studies were conducted in vitro to evaluate the cytotoxicity of these products and to better understand the mechanism of action of these molecules. Our results indicate that these polymers are not toxic and that the improvement of gene transfer is not in permeabilizing the membrane of muscle cells. Finally, the study deoxycholic acid, a bile acid, has yielded very encouraging results in gene transfer into muscle since equally effective or even superior to that of poloxamers has been obtained. However, these results remain to be demonstrated more clearly
Immunothérapie antitumorale par transfert de l'ARN messager de l'antigène MelanA/MART-1 by Michaël Mockey( Book )

1 edition published in 2006 in French and held by 1 WorldCat member library worldwide

Une réponse antitumorale suite à l'induction de lymphocytes T cytotoxiques peut être générée après transfert in vitro ou directement in vivo d'ARNm d'antigènes tumoraux dans les cellules dendritiques (DCs). Cependant, peu de vecteurs permettent une introduction efficace d'ARNm dans les DCs. Nous avons élaboré des nanoparticules d'ARNm avec des polymères cationiques histidylés (polyplexes), des lipides cationiques histidylés (lipoplexes) ou un mélange des deux (lipopolyplexes). Ces vecteurs deviennent fusiogenes en milieu acide et favorisent la délivrance de l'ARNm dans le cytosol lors de son endocytose. Une optimisation de l'ARNm en ajoutant en 5' une coiffe 3'-O-méthyl-m75'Gppp5'G (ARCA) et en 3' une queue de 100 adénosines (A100) a permis la synthèse d'un transcrit ARCA-ARNm-A100 qui permet une bonne expression de l'antigène dans les DCs. La polyéthylèneimine hisidylée a été identifiée comme étant un bon agent de transfert de l'ARNm de l'antigène du mélanome MART-1 dans les DCs matures in vitro. Pour une vaccination par injection directe de l'ARNm codant l'antigène, nous avons développé de nouvelles nanoparticules tripartites (lipopolyplexes) correspondant à des polyplexes d'ARNm ARCA-MART1-A100 avec un dérivé PEGylé de la polylysine histidylée encapsulés dans des liposomes histidylés. Par injection systémique, ces lipopolyplexes induisent un effet protecteur spécifique et significatif contre la progression tumorale cutanée et métastatique pulmonaire du mélanome murin B16F10. La mise en place d'une réponse immune de type Th1 avec une forte sécrétion d'IFN-g et une activité T cytotoxique a pu être mise en évidence montrant ainsi l'intérêt des lipopolyplexes histidylés
 
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